Frotis

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.

Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resulta suficiente.

Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado.Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos.

Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.

Tipos de siembras en medio de cultivo

Cultivo en medio líquido Habitualmente se realiza en tubos o en matraces. El crecimiento se puede manifestar por enturbiamiento, por formación de velo o película, o por sedimento.Cultivo en medio sólido Puede ser en tubos o placas.

a) Tubos con agar inclinado.Para sembrarlos, se mueve el ansa o la punta suavemente sobre la superficie del agar con un movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte superior, cuidando de no dañar el agar

.b) Tubos sin inclinar.Se siembran introduciendo una punta en el centro del agar. También se llama siembra por picadura.

c) Siembra en placas.Puede ser en superficie o incorporada.

En superficie:

1) Se colocan 0.1 mL de la dilución de la muestra con pipeta estéril en el centro de la placa, y se distribuye con un rastrillo estéril.

2) Se siembra con un ansa para aislar, como se explica más adelante

.3) Se siembra con un hisopo.IncorporadaSe coloca 1 mL de la muestra en una placa estéril vacía, en el centro de la misma. Sobre ella se agregan 20 mL de medio de cultivo fundido y termostatizado a 45ºC; luego se agita la placa, moviéndola 4 veces en sentido horario, 4 en sentido antihorario, una vez de arriba a abajo, una vez hacia los costados y una vez en sentido antihorario.Las placas se incuban invertidas, ya que la alta concentración de agua en el medio puede provocar condensación durante la incubación y si cae sobre la superficie del agar, se extiende dando un crecimiento confluente.En medio sólido cada célula viable dará origen a una colonia y por lo tanto la siembra en placas se puede utilizar, no solo para cultivar microorganismos, sino además para contar y aislar.En general cuando se quieren tener colonias aisladas a partir de un material determinado, es necesario diluir la muestra en tubos con suero fisiológico estéril.

Investigacion de tincion

Mecanismos de Coloración:La coloración celular y tejidos son una combinación de fenómenos físicos y químicos de absorción:los fenómenos físicos de absorción, capilaridad y ósmosis participan en cierto grado. La afinidad de colorantes básicos por los tejidos ácidos y viceversa indican que hay reacción química.

Los Colorantes:

Son compuestos, orgánicos que contienen radicales cromóforos esto es que producen color y grupo de anxocromos que forman sales los grupos nitrito (-NO2) y azo (-N = N) son cromóforos.Los radicales hidroxilo (-OH) y amino (-NH2) son grupos anxocromos. Los cromóforos imparten la propiedad cromógena al colorante y los anxocromos permiten que el colorante se una con la fibra o tejido.

Preparación de Frotis Bacteriano para Coloración:

Entes de la tinción las bacterias suelen encontrarse en agua o en otro líquido en un porta objeto limpio y son extendido en una película uniforme y delgada. Se deja que la película seque en el aire y los microorganismos son fijados por sustancias químicas o por el calor moderado.

Tinciones:

Es un método utilizado para estudiar microorganismos. (no vivos); en estas tinciones se observa morfología, estructura y agrupamientos de microorganismos.

Tipos de Tinción:

Tinción Simple:

utiliza un solo colorante.

Tinción de Gram:
Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado con alcohol, Safranina 30 seg)

Tinción Ácido Resistente:
Una vez teñidos, conservan su color resistiendo al lavado con ácido mineral reducido. En esta tinción las bacterias ácido resistentes conservan el colorante primario color rosa o rojo, los demás microorganismos son decolorados por el ácido y toman el color azul.

Tinción de Giensa:

El colorante se aplica a un frotis de sangre y se utiliza cuando se sospeche de protozoos en la sangre para observar materias núcleos de la células.

Tinción de Esporas:

Se usa verde de malaquita en contraste con safranina.Tinción de Cápsula:Colorante nigrosuna, aquí se observa microorganismos encapsulados creando resistencias.

Tinción de Flagelos:

Se usa mordiente el cual aumenta el tamaño del microorganismo.

Endósporas:

Son unos cuerpos resistentes que se producen en el interior de la célula los cuales contienen los componentes necesarios para conservar la vida.Las esporas pueden situarse en el centro de la célula o en situaciones excéntricas cerca de un extremo de la misma.

Levaduras:

Son esféricas, elípticas y cilíndricos, su tamaño varía notablemente. Son hongos cuya forma corriente y dominante de crecimiento es unicelular.

Las Cápsulas:

Son estructuras grueso viscosas gelatinosas que rodean las células de algunas especies.

Sarcina:

Son anaerobios obligados y son extremadamente ácido – tolerantes que pueden fermentar azúcares y crecer a pH inferior a 2.Este género comprende 2 especies de bacterias que se dividen en tres planos perpendiculares para producir paquetes de 8 en una célula.

Bacillus Cereus:

La mayoría se encuentra en el suelo o en partículas de polvo en suspensión y son uno de los organismos del género Bacillus que pueden ser aislados fácilmente.Puesto que los formadores de esporas pueden aislarse selectivamente a partir del suelo, alimentos o de otro material dejando las muestras a 80 ºC durante 10 minutos.Los bácillus suelen crecer en medios sistemáticos que contengan azúcares, ácidos orgánicos, alcoholes, etc, como única fuente de carbono y amoníaco como única fuente de nitrógeno.

Investigacion de medio de cultivo

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientesque en concentraciones adecuadas y en condicionesfísicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos.Estos medios son esenciales en el Laboratoriode Microbiología por lo que un control en sufabricación, preparación, conservación y uso, asegurala exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de losresultados obtenidos.

Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdoa la naturaleza de sus constituyentes en:


Medios naturales o complejos:

constituidos porsustancias complejas de origen animal o vegetal,las que son usualmente complementadas por laadición de minerales y otras sustancias. En ellosno se conocen todos los componentes ni las cantidadesexactas presentes de cada uno de ellos.

Medios definidos o sintéticos:
son los medios que tienen una composición químicadefinida cuali y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos deinvestigación.
De acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasifican en:

Medios de enriquecimiento:
son medios líquidos que favorecen el crecimientode un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el número demicroorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o más sustanciasinhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepción de los quese quieren cultivar.

Medios selectivos:
son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian porser medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismosespecíficos.

TAREA No.1 (3er parcial)

Paramesium:
Los paramecios son protozoos ciliados con forma de suela de zapato o eclipsoide, abunda en lagos, estanques y charcos. Se mueve constantemente, para lo cual se sirve de innumerables hebras microscópicas llamadas cilios, con los que golpea el agua a modo de remos. Los paramecios se alimentan de bacterias y otros organismos microscópicos. Para atrapar su alimento, utilizan una boca en forma de ranura.
Son probablemente los seres unicelulares mejor conocidos y los protozoos ciliados más estudiados por la ciencia. El tamaño ordinario de todas las especies de paramecios es de apenas 0.05 milimetros.
La membrana externa absorbe y expulsa regularmente el agua del exterior con el fin de controlar la osmorregulación, proceso dirigido por dos vacuolas contráctiles.
En su anatomía destaca el citostoma, una especie de invaginación situada a todo lo largo del paramecio de la que éste se sirve para capturar el alimento, conformado por partículas orgánicas flotantes y microorganismos menores.

Salmonella:
es un género de bacteria que pertenece a la familia Enterobacteriaceae, formado por bacilos gramnegativos, anaerobios facultativos, con flagelos perítricos y que no desarrollan cápsula ni esporas. Son bacterias móviles que producen sulfuro de hidrógeno (H2S). Fermentan glucosa por poseer una enzima especializada, pero no lactosa, y no producen ureasa.
Es un agente zoonótico de distribución universal. Se transmite por contacto directo o contaminación cruzada durante la manipulación, en el procesado de alimentos o en el hogar, también por vía sexual.
Con importancia clínico epidemiológica, las más de 2000 serovariedades de Salmonella pueden agruparse en tres divisiones ecológicas (spp. son subespecies):-Salmonella spp. adaptadas a vivir en el ser humano, entre ellas, S. typhi, S. paratyphi A, B y C;-Salmonella spp. adaptadas a hospederos no humanos, que circunstancialmente pueden producir infección en el hombre, entre ellas, S. dublin y S. cholerae-suis;-Salmonella spp. sin adaptación específica de hospedero, que incluye a unas 1800 serovariedades de amplia distribución en la naturaleza, las cuales causan la mayoría de las salmonelosis en el mundo.

Escherichia coli:
Escherichia coli (E. coli) es quizás el organismo procarionte más estudiado por el ser humano, se trata de una bacteria que se encuentra generalmente en los intestinos animales y por ende en las aguas negras. Fue descrita por primera vez en 1885 por Theodore von Escherich, bacteriólogo alemán.
Ésta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso digestivo. Además produce vitaminas B y K. Es un bacilo que reacciona negativamente a la tinción de Gram (gramnegativo), es anaeróbico facultativo, móvil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa y su prueba de IMVIC es ++--.
E. coli, en su hábitat natural, vive en los intestinos de la mayor parte de mamíferos sanos. Es el principal organismo anaerobio facultativo del sistema digestivo. En individuos sanos, es decir, si la bacteria no adquiere elementos genéticos que codifican factores virulentos, la bacteria actúa como un comensal formando parte de la flora intestinal y ayudando así a la absorción de nutrientes. En humanos, E. Coli coloniza el tracto gastrointestinal de un neonato adhiriéndose a las mucosidades del intestino grueso en el plazo de 48 h después de la primera comida.

Proteus:
Proteus es un genero de bacterias gramnegativas, que incluye patógenos responsables de muchas infecciones del tracto urinario.[1] Las especies de Proteus normalmente no fermentan lactosa por razón de tener una β galactosidasa, pero algunas se han mostrado capaces de hacerlo en el test TSI. Tienden a ser organismos pleomórficos, no esporulados ni capsulados y son productoras de fenilalanina desaminasa.
Crecen en medios corrientes y moderadamente selectivos a temperatura corporal de 37ºC. Crecen formando capas diseminadas por virtud de su gran motilidad. Existen variantes inmóviles que forman colonias lisas.
Hay tres especies que causan infecciones oportunistas en el hombre: P. vulgaris, P. mirabilis, y P. penneri. Causan infecciones urinarias (más del 10% de complicaciones del tracto urinario incluyendo cálculos y lesiones celulares del epitelio renal).

Brucella abortus:
Brucella es un género de bacterias Gram negativas.[1] Son cocobacilos pequeños (0,5-0,7 por 0.6-1.5 µm), no-móviles y encapsulados.
Brucella es la causa de la brucelosis, una verdadera enfermedad zoonótica. Es transmitida por la ingestión de comida infectada, contacto directo con un animal infectado o por inhalación de aerosoles. La exposición infecciosa mínima está en 10-100 organismos. La brucelosis se produce principalmente por exposición ocupacional (por ejemplo, exposición al ganado, ovejas, cerdos), pero también por el consumo de productos lácteos no pasteurizados.

Brucella se aisla de cultivos sobre un medio de sangre. Puede requerir una incubación prolongada (hasta 6 semanas) puesto que son organismos de crecimiento lento, pero sobre las máquinas automáticas modernas, los cultivos a menudo pueden ser positivos en siete días. Mediante la tinción de Gram aparecen como densas aglomeraciones de cocobacilos Gram-negativos.

pie de rey

1.- Es un instrumento para medir dimensiones de objetos relativamente pequeños, Se atribuye al cosmógrafo y matemático portugués que se llama:Pedro Nuñez.

2.- En qué año se le atribuye el pie de rey al cosmógrafo y matemático portugués?1514

3.- También se ha llamado pie de rey al:Vernier

4.- En que año se le atribuye el pie de rey al geómetra pedro Vernier.1631

5.- ¿Qué otro nombre recibe el origen del pie de rey?Nonio o Nonios

1- Mordaza para medidas externas.

2- Mordaza para medidas internas.

3- Colizo para medida de profundidades.

4- Escala con divisiones en centímetros y milímetros

5- Escala con divisiones en pulgadas.

6- Nonio para la lectura de las fracciones de milímetros en que esté dividido.

7- Nonio para la lectura de las fracciones de pulgada en que esté dividido.
8- Botón de deslizamiento y freno.

Descripcion del Pie De Rey:
Consta de una "regla" con una escuadra en un extremo, sobre la cual se desliza otra destinada a indicar la medida en una escala. Permite apreciar longitudes de 1/10, 1/20 y 1/50 de milímetro utilizando el nonio.

Mediante piezas especiales en la parte superior y en su extremo, permite medir dimensiones internas y profundidades.

Posee dos escalas: la inferior milimétrica y la superior en pulgadas. Mordazas para medidas externas.

Mordazas para medidas internas. Coliza para medida de profundidades. Escala con divisiones en centímetros y milímetros.

Escala con divisiones en pulgadas y fracciones de pulgada. Nonio para la lectura de las fracciones de milímetros en que esté dividido.

Nonio para la lectura de las fracciones de pulgada en que esté dividido. Botón de deslizamiento y freno.

PRACTICA No.4:pipeteo

INTRODUCCION.La pipeta es un instrumento volumetricas de laboratorio que permite medir alicuotas de líquido con bastante precisión. Suelen ser de vidrio. Está formado por un tubo hueco transparente que termina en una de sus puntas de forma cónica, y tiene una graduación (una serie de marcas grabadas) indicando distintos volúmenes.

OBJETIVO.El objetivo de esta práctica es aprender a pipetear y medir volúmenes con la pipeta graduadas y la automática.En esta practica tuvimos que llevar acabo pipeteos con los siguientes materiales

1.-Matraz.

2.- pipeta de sali.

3.-Pipeta pausterur .

4.-Pipeta graduada.

llenamos el matraz con cierta cantidad de agua , tuvimos que utilizar las pipetaspara transportar el agua y saber cuantas pipeteadas tuvimos que haser parallenar la pipeta graduada.Una ves llenada la pipeta graduada devimos anotar las pipeteadas que tuvimos que aser con la pipeta pasteur despues con la pipeta de sali y asi susesivamente.

CONCLUCION.Esta practica de pipeteo nos sirvió para irnos familiarizando con el uso que se le debe de dar a las pipetas y para aprender a medir volúmenes, aunque creo que para hacerlo bien una practica no es suficientepara aprender a tantear sin cometer tantos errores y por lo tanto ocupar mas tiempo, ya que el tiempo también es importante como en todas las practicas